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1、 適用范圍:
適用于各種食品、原料及純水樣品中含有大腸菌群的快速測定。
2、 方法原理:
將乳糖、顯影劑和選擇性培養基分別裝入一張紙上。經過培養,可以在紙上生長并發酵乳糖產生酸的細菌被認為是大腸菌群陽性。稀釋度大腸菌群陽性紙片數,根據大腸菌群MPN表找出相應的大腸菌群數。
3、方法特點:
與國標法中的九管法相對應,實驗的最初步驟簡化為一步,和從78 h時間縮短到不到24 h,不再需要大量的輔助設施如培養基的制備、消毒和清潔文化的血管。工作時,可以隨時打開包裝進行取樣和測試。
4、 操作方法
(1)樣品處理:無菌重25克(或25毫升)的樣本采樣瓶或均化杯含有225毫升無菌生理鹽水,徹底擺脫1:10樣品勻漿,并使用1毫升,消除細菌吸管1:10樣品勻漿,將它注入試管中包含9毫升無菌生理鹽水,搖動試管,稀釋1:100。通過類推,每次稀釋都要更換一根無菌吸管。
(2)接種:選擇兩種稀釋液接種。普通食品一般用1:10和1:10的兩種稀釋劑,而飲料和飲用水則用1:10的兩種稀釋劑。每一部分由三張大紙(連接到10mL)和六張小紙(連接到1mL)組成。每張大紙與每袋兩張紙疊放時視為一張紙。用無菌移液管抽取1:10稀釋的10ml,放入裝有一張大紙(相當于1g樣品)的塑料袋中,吸收后平放,重復三次。然后用1mL無菌移液管抽1mL同樣的稀釋液,涂于裝有一張0.1g樣品的小紙片的塑料袋上,重復三次。另取1ml無菌移液管,抽取1ml 1:100稀釋液,置于裝有小紙片(相當于0.01g樣品)的塑料袋中,重復三次。
(3)培養:將接種紙(可堆疊)置于37℃培養箱中培養15h-24h。
5. 結果判斷和計數:如果紙張變黃或黃色背景上出現紅點,則為大腸菌群陽性。紙張保持相同的紫藍色或在紫藍色的背景上出現紅點,但沒有黃色的周圍的紙張是陰性的大腸菌群。記錄每種稀釋液中陽性大腸菌群數量,根據大腸菌群MPN表找出相應的大腸菌群數量。如果接種液的第一次稀釋是原溶液,在桌面上找到的結果應除以10,以此類推。
6. 注意事項:當樣品的pH值低于pH 7時,應先用1mol/L無菌氫氧化鈉(NaOH)將溶液調至中性,以免pH值引起紙張泛黃,影響觀察結果。
適用于各種食品、原料及純水樣品中含有大腸菌群的快速測定。
2、 方法原理:
將乳糖、顯影劑和選擇性培養基分別裝入一張紙上。經過培養,可以在紙上生長并發酵乳糖產生酸的細菌被認為是大腸菌群陽性。稀釋度大腸菌群陽性紙片數,根據大腸菌群MPN表找出相應的大腸菌群數。
3、方法特點:
與國標法中的九管法相對應,實驗的最初步驟簡化為一步,和從78 h時間縮短到不到24 h,不再需要大量的輔助設施如培養基的制備、消毒和清潔文化的血管。工作時,可以隨時打開包裝進行取樣和測試。
4、 操作方法
(1)樣品處理:無菌重25克(或25毫升)的樣本采樣瓶或均化杯含有225毫升無菌生理鹽水,徹底擺脫1:10樣品勻漿,并使用1毫升,消除細菌吸管1:10樣品勻漿,將它注入試管中包含9毫升無菌生理鹽水,搖動試管,稀釋1:100。通過類推,每次稀釋都要更換一根無菌吸管。
(2)接種:選擇兩種稀釋液接種。普通食品一般用1:10和1:10的兩種稀釋劑,而飲料和飲用水則用1:10的兩種稀釋劑。每一部分由三張大紙(連接到10mL)和六張小紙(連接到1mL)組成。每張大紙與每袋兩張紙疊放時視為一張紙。用無菌移液管抽取1:10稀釋的10ml,放入裝有一張大紙(相當于1g樣品)的塑料袋中,吸收后平放,重復三次。然后用1mL無菌移液管抽1mL同樣的稀釋液,涂于裝有一張0.1g樣品的小紙片的塑料袋上,重復三次。另取1ml無菌移液管,抽取1ml 1:100稀釋液,置于裝有小紙片(相當于0.01g樣品)的塑料袋中,重復三次。
(3)培養:將接種紙(可堆疊)置于37℃培養箱中培養15h-24h。
5. 結果判斷和計數:如果紙張變黃或黃色背景上出現紅點,則為大腸菌群陽性。紙張保持相同的紫藍色或在紫藍色的背景上出現紅點,但沒有黃色的周圍的紙張是陰性的大腸菌群。記錄每種稀釋液中陽性大腸菌群數量,根據大腸菌群MPN表找出相應的大腸菌群數量。如果接種液的第一次稀釋是原溶液,在桌面上找到的結果應除以10,以此類推。
6. 注意事項:當樣品的pH值低于pH 7時,應先用1mol/L無菌氫氧化鈉(NaOH)將溶液調至中性,以免pH值引起紙張泛黃,影響觀察結果。
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